Reinheit in Prozent: Was der Wert beweist und was nicht

Der Wert ist ein Anteil des Detektierten

Ein HPLC-Reinheitswert ist eine relative Peakfläche: der Hauptpeak als Anteil an der gesamten Fläche, die mit dieser Methode unter diesen Bedingungen integriert wurde. Die Probe wird durch eine Säule gedrückt, die Moleküle nach der Stärke ihrer Wechselwirkung mit dem Säulenmaterial trennt; ein UV-Detektor registriert, was die Säule verlässt, und eine Software zeichnet die Peaks und summiert sie. Entfallen 99 % dieser Summe auf den Hauptpeak, weist das Zertifikat 99 % aus.

Der Wert ist damit ein Anteil der detektierten Probe, nicht von allem, was in ihr steckt. Bei den Peaks neben dem Hauptpeak handelt es sich in der Regel um peptidverwandte Verunreinigungen aus Synthese oder Lagerung: Sequenzen, denen eine Aminosäure fehlt, Sequenzen mit einer zusätzlichen, oxidierte oder desamidierte Formen und Diastereomere. D'Hondt und Kollegen (2014) katalogisierten diese als die am häufigsten beobachteten Verunreinigungen in Peptidarzneimitteln, und genau sie soll ein guter HPLC-Reinheitslauf auftrennen (siehe woher Verunreinigungen stammen).

Was die Methode nicht erfassen kann, taucht im Nenner schlicht nicht auf. Wasser, Gegenionen wie Acetat oder Trifluoracetat, Restlösemittel und Endotoxine bilden in einem Standard-Reinheitslauf bei Peptid-Wellenlängen keine chromatographischen Peaks und können in einem Wert von 99 % daher vollständig fehlen.

Warum 99 % nicht 99 % der Masse sind

Weil diese Nicht-Peptid-Bestandteile kein Signal liefern, ist ein Reinheitswert kein Massenanteil. Ein Peptid kann per HPLC zu 99 % rein sein und trotzdem einen beträchtlichen Teil seines Gewichts aus Wasser und Gegenion beziehen. Wang und Kollegen (2022) zeigten die Größe dieser Lücke, als sie einem synthetischen Oxytocin per Massenbilanz einen Referenzwert zuwiesen: Nach Messung des Wassers per Karl-Fischer-Titration, der Gegenionen per Ionenchromatographie und der Restlösemittel per Gaschromatographie ergab sich ein Peptidgehalt von 796,5 mg pro Gramm, obwohl das Material chromatographisch von gewöhnlicher pharmazeutischer Qualität war.

Innerhalb des Chromatogramms selbst kommt ein zweiter, kleinerer Effekt hinzu. Flächenprozente unterstellen, dass jede Komponente UV-Licht pro Masseneinheit gleich stark absorbiert, was nicht zutrifft. ICH Q2(R2), die harmonisierte Leitlinie zur Validierung analytischer Verfahren, adressiert das direkt: Reagiert eine Verunreinigung anders als die Hauptkomponente, wird ein relativer Responsefaktor berechnet, und liegt er außerhalb von 0,8 bis 1,2, wird ein Korrekturfaktor angewendet. Viele Routinezertifikate geben eine unkorrigierte Flächennormalisierung an; für eine Reinheitsprüfung ist das akzeptabel, aber es ist ein weiterer Grund, warum die Zahl einen Anteil des Signals beschreibt und nicht des Materials.

Ohne Methode ist ein Prozentwert kein Ergebnis

Reinheit hängt von der Methode ab. Dieselbe Probe kann unter anderen Bedingungen andere Werte liefern: eine andere Säule, ein anderer Gradient, eine andere mobile Phase, Wellenlänge oder Laufzeit. Eine Verunreinigung, die in der einen Methode mit dem Hauptpeak koeluiert, trennt sich in einer anderen womöglich sauber ab; ein hydrophobes Aggregat kann erst nach dem Ende des Gradienten eluieren und wird dann nie integriert. Vergleichbar ist ein Reinheitswert nur, wenn die zugrunde liegende Methode daneben steht.

Aus diesem Grund behandelt ICH Q2(R2) ein Reinheitsverfahren als etwas, das für seinen Zweck validiert sein muss, mit nachgewiesener Spezifität, Präzision und nachgewiesenem Arbeitsbereich für die tatsächlich eingesetzten Bedingungen. Die brauchbare Form eines Reinheitsergebnisses nennt daher die Methode (siehe was HPLC und Massenspektrometrie jeweils belegen), die Spezifikation, gegen die die Charge geprüft wurde, und den gemessenen Wert.

Reinheit ist eine von drei Fragen

Zu jedem Peptid gibt es drei getrennte Fragen: Was ist es, wie rein ist es, und ist es steril. Der Reinheitswert beantwortet nur eine davon. Ein hoher Reinheitswert verrät nichts darüber, ob der Pen tatsächlich den angegebenen Wirkstoff enthält, weil HPLC Peaks über die Retentionszeit vergleicht, statt die Struktur zu bestätigen – und nichts über Sterilität, die bei einem Produkt zur Injektion am meisten zählt.

Jede Charge, die wir nach Österreich liefern, wird von einem unabhängigen Labor auf genau diese drei Punkte geprüft: Identität per Massenspektrometrie, Reinheit per HPLC und Sterilität. Das Zertifikat jeder Charge steht als einfaches PDF in unserem COA-Verzeichnis, und der QR-Code auf dem Pen öffnet dasselbe Dokument. Nehmen Sie den MOTS-C 32 Pen als Beispiel: Das Zertifikat hinter seinem QR-Code ist der Bericht zur exakten Charge, kein generisches Muster.

Bei zugelassenen Peptidarzneimitteln gehen die Arzneibuch-Monographien weiter. Eine vollständige Freigabespezifikation ergänzt typischerweise einen Gehaltswert gegen einen kalibrierten Referenzstandard, Wassergehalt, Gegenionengehalt, Restlösemittel und eine Endotoxingrenze – so wurde auch die oben genannte Massenbilanzstudie aufgebaut. Solche Prüfungen gehören zu einem Zulassungsdossier, wie es in Österreich das BASG (Bundesamt für Sicherheit im Gesundheitswesen) für ein zugelassenes Arzneimittel bewertet; dass sie auf einem Zertifikat fehlen, macht die Prüfungen, die darauf stehen, nicht weniger real. Es heißt aber, dass der Reinheitswert als das gelesen werden sollte, was er ist: das chromatographische Ergebnis für diese Charge unter der angegebenen Methode.

Zertifikat und Paket gemeinsam lesen

Ein Zertifikat hält den Zustand der Charge zum Zeitpunkt der Laborprüfung fest. Über das, was danach passiert, kann es nichts sagen – deshalb versenden wir in isolierter Verpackung mit Kühlelement und Temperaturindikator und halten die Pens von unserem tschechischen Versandstandort über die kurze Strecke nach Österreich bis in Ihren Kühlschrank bei 2–8 °C; die Zustellung an Ihre Adresse übernimmt in der Regel die Österreichische Post oder der österreichische Partner des Kuriers, verfolgbar von Tür zu Tür. Der Indikator beantwortet die Transportfrage, das Zertifikat die Freigabefrage. Prüfen Sie beides, sobald das Paket bei Ihnen ankommt: Sehen Sie sich zuerst den Indikator an (die Zertifikatsseite behandelt der Chargenabgleich). Zeigt er eine Überschreitung, ersetzen wir den Pen nach einem Foto oder kurzen Video kostenlos – unabhängig davon, was das Zertifikat sagt, denn Stabilität unter Bedingungen, die nie gemessen wurden, kann kein Zertifikat nachträglich belegen.